O diagnóstico da SAF é baseado em exames clínicos e laboratoriais e requer pelo menos um critério clínico em conjunto com um critério laboratorial (Tabela I).
De acordo com as diretrizes do ISTH Scientific and Standardization Committee (SSC), o teste de anticoagulante lúpico deve ser realizado apenas em pacientes com risco significativo de SAF ou que apresentem prolongamento inexplicável do tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA).
O diagnóstico laboratorial é complexo devido à falta de alterações nos parâmetros laboratoriais para SAF. O diagnóstico laboratorial baseia-se, portanto, numa bateria de testes que inclui testes de coagulação e ELISA.
Testes de coagulação
Os testes de coagulação são realizados para demonstrar a presença de anticoagulante lúpico capaz de prolongar o tempo dos testes de coagulação à base de fosfolipídeos. A presença de anticoagulante lúpico é altamente específica para SAF e há forte associação entre este e eventos trombóticos ou perda fetal. No entanto, o número de falsos positivos e falsos negativos é bastante elevado. Muitos fatores podem afetar a falta de sensibilidade e especificidade desses testes, incluindo variáveis pré-analíticas, analíticas e pós-analíticas.
Critérios diagnósticos para anticoagulante lúpico circulante
Existem quatro desses critérios e estão resumidos abaixo.
Tabela II: Critérios para diagnóstico laboratorial do anticoagulante lúpico
Variáveis pré-analíticas na triagem de anticoagulante lúpico circulante
A etapa pré-analítica é crucial para o diagnóstico da SAF.
A presença de plaquetas residuais no plasma pode afetar os testes de coagulação que dependem de fosfolipídios derivados de plaquetas; tais fosfolípidios podem neutralizar os anticorpos antifosfolípides presentes na amostra e produzir falsos negativos.
Recomenda-se, portanto, que seja realizada uma centrifugação dupla, compreendendo uma centrifugação inicial a 2 000g durante 15 minutos à temperatura ambiente, seguida de uma segunda centrifugação a mais de 2.500g durante 10 minutos, a fim de obter plasma contendo menos de 10 000 plaquetas/µL.
Escolha de testes
Muitos testes dependentes de fosfolipídios foram propostos. Devido à sensibilidade variável entre os testes, bem como à falta de padronização em determinados testes, a Sociedade Internacional de Trombose e Hemostasia (ISTH) emitiu diretrizes relativas à escolha dos testes a serem utilizados.
Devem ser usados dois sistemas de teste separados usando princípios diferentes.
O tempo diluído do veneno da víbora Russell (DRVVT) deve ser usado em todos os casos. Este teste é considerado específico e robusto para detecção de anticoagulantes lúpicos. O segundo teste a ser realizado é o APTT utilizando sílica como ativador devido à sua sensibilidade. Não é recomendado o uso de caulim ou ácido elágico como ativador, nem o uso do tempo de tromboplastina diluída, de testes baseados nos tempos de ecarina ou textarina, ou do tempo de coagulação do caulim.
Teste de mistura
O pool de plasma utilizado deve ser preparado de acordo com os métodos usuais. É necessária dupla centrifugação para obter plasma contendo menos de 10.000 plaquetas/µL e com atividade próxima de 100% para todos os fatores. O pool de plasma comercial, liofilizado ou congelado, pode ser utilizado desde que atenda às condições exigidas e tenha sido validado para esse fim. O teste de mistura deve envolver uma proporção de 1:1 entre o plasma de teste e o plasma normal sem pré-incubação. O teste do tempo de trombina antes do teste de mistura poderia demonstrar a presença de heparina ou outros inibidores na amostra. Porém, alguns reagentes, principalmente os utilizados nos testes de DRVVT, contêm um inibidor de heparina, permitindo que o teste seja realizado em amostras contendo até 0,8 UI de anti-Xa/mL.
Testes de confirmação
Estes envolvem a avaliação da correção do tempo de coagulação da amostra de plasma na presença de excesso de fosfolipídios. Devem ser usados fosfolipídios de bicamada ou fosfolipídios de fase hexagonal. Por outro lado, o uso de plaquetas congeladas e descongeladas não é recomendado devido à variação entre lotes.
Exclusão de inibidores específicos dirigidos contra fatores de coagulação
O rastreio de um inibidor específico contra um determinado fator de coagulação (principalmente fator VIII ou fator IX) é essencial, uma vez que a presença de tais inibidores pode expor os doentes a um risco hemorrágico elevado e potencialmente fatal, exigindo tratamento imediato por equipas especializadas. Este teste envolve a análise do fator em questão e, quando necessário, a triagem específica e a análise do inibidor.
Testes ELISA
A triagem de anticorpos anticardiolipina e anti-ß2-GPI é indicada na classificação da SAF (Tabela I). Embora o rastreio de anticorpos IgG e IgM seja necessário em ambos os casos, o valor do rastreio de anticorpos IgM é contestado devido à sua aparentemente fraca correlação com sinais trombóticos. Além disso, deve-se levar em consideração a possível presença de crioglobulina ou fator reumatóide ao interpretar os resultados dos testes de anticorpos IgM.
A triagem de anticorpos anti-2-GPI é especialmente importante em pacientes com resultados negativos na triagem do anticoagulante lúpico, apesar da forte suspeita de SAF. O teste de anticorpos anti-?2-GPI parece mais específico do que o teste de anticorpos anticardiolipina no diagnóstico de SAF. O rastreio de anticorpos anti-?2-GPI pode, de facto, ser o único teste positivo para 3 a 10% dos pacientes que apresentam SAF. Apesar da falta de padronização dos testes, os testes para anticorpos anti-?2-GPI parecem mais reprodutíveis do que os testes para anticorpos anticardiolipina.
Outros Testes
Geração de trombina e anticorpos antifosfolípides
Estudos demonstraram inibição da geração de trombina em pacientes que apresentam SAF, particularmente quando estão presentes anticorpos anti-2-GPI. Além disso, a inibição da geração de trombina está correlacionada com a existência de sinais clínicos prévios